1. Klassifisering
Gelelektroforese er delt inn i vertikale typer (inkludert kolonnegeler og plategeler) og horisontale typer (hovedsakelig plategeler) (Figur 6-18). Vanligvis er vertikal separasjon litt bedre enn horisontal, men horisontal gelpreparering har minst fire fordeler: det er støtte under hele gelen, som tillater bruk av lavkonsentrasjon agarose; det er mulig å tilberede agarosegelplater med forskjellige spesifikasjoner; gelforberedelse og prøvelasting er mer praktisk; elektroforesekammeret er enkelt å konstruere og kostnadseffektivt. Siden horisontal elektroforese utføres med agarosegelplaten fullstendig nedsenket ca. 1 mm under overflaten av elektroforesebufferen, kalles det også nedsenket elektroforese.
Elektroforesetank DYCP-31DN for agarosegelelektroforese
2. Buffersystem
Ved nukleinsyreseparasjon bruker de fleste systemer kontinuerlige systemer. Vanlig brukte elektroforesebuffere inkluderer TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L borsyre, 0,0024mol/L EDTA) buffer og THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L natriumacetat, 0,0018 mol/L EDTA) buffer. Disse bufferne fremstilles vanligvis som 10x stamløsninger og fortynnes til den nødvendige konsentrasjonen når de er i bruk. Migrasjonshastighetene til lineært og sirkulært DNA i agarosegel varierer med bufferen som brukes. I THE buffer er migrasjonshastigheten til lineært DNA større enn for sirkulært DNA, mens i TBE-buffer er det motsatte sant.
3. Fremstilling av agarosegel
(1) Fremstilling av horisontal agarosegel
(a) Forbered den nødvendige konsentrasjonen av agarosegel ved å bruke 1x elektroforesebuffer.
(b) Varm opp agarosen til fullstendig oppløsning enten i et kokende vannbad, på en magnetisk rører eller i en mikrobølgeovn. Avkjøl agaroseløsningen til 55 °C og tilsett etidiumbromid (EB) fargestoff til en sluttkonsentrasjon på 0,5 μg/ml.
(c) Forsegl kantene på glass- eller akrylplater med en liten mengde agarosegel, legg til en kam og plasser kamtennene omtrent 0,5~1,0 mm over platen.
(d) Hell den smeltede agarosegelløsningen kontinuerlig i glass- eller akrylplateformen (tykkelsen avhenger av volumet på DNA-prøven), og unngå innføring av luftbobler. La det stivne naturlig ved romtemperatur.
(e) Fjern forsiktig kammen etter fullstendig størkning. Tilsett en passende mengde elektroforesebuffer til geltanken, og sørg for at gelplaten er nedsenket ca. 1 mm under overflaten av elektroforesebufferen.
(2) Fremstilling av vertikal agarosegel
(a) Fjern fett eller rester fra glassplatene ved å vaske med etanol.
(b) Plasser avstandsplater mellom fremre og bakre demninger, juster kantene på avstandsplatene med de fremre og bakre demningene, og fest dem med klemmer.
(c) Tilsett 2% agarose i 1x buffer mellom kantene på avstandsplatene for å danne en 1 cm høy agaroseplugg i bunnen av gelstøpekammeret.
(d) Hell den smeltede agarosegelen i ønsket konsentrasjon, tilberedt i 1x buffer, inn i gelkammeret opptil 1 cm under toppen.
(e) Sett inn kammen, unngå å fange luftbobler under kammen. Noen ganger kan det oppstå rynker ved kamtennene under agarosegelkjøling; i slike tilfeller, tilsett litt smeltet agarose på toppen for å stivne den.
(f) Fjern kammen. For å forhindre bufferlekkasje i ladesporet, forsegle forbindelsen mellom agarosegelplaten og elektroforesekammeret med 2 % agarose og tilsett den nødvendige mengden buffer.
(g) Tilsett 1x elektroforesebuffer til gelkammeret.
(h) Last DNA-prøver forsiktig på agarosegelen under bufferen.
Mer informasjon om den grunnleggende kunnskapen om agarosegelelektroforese deler vi neste uke. Skulle ønske at denne informasjonen var nyttig for eksperimentet ditt.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har spesialisert seg på produksjon av elektroforeseinstrumenter i mer enn 50 år med vårt eget profesjonelle tekniske team og FoU-senter. Vi har pålitelig og komplett produksjonslinje fra design til inspeksjon, og lager, samt markedsstøtte. Våre hovedprodukter er elektroforesecelle (tank/kammer), elektroforesestrømforsyning, blå LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbilde- og analysesystem etc.
Vi ser nå etter partnere, både OEM elektroforesetank og distributører er velkommen.
Hvis du har en kjøpsplan for produktene våre, ikke nøl med å kontakte oss. Du kan sende oss melding på e-post[e-postbeskyttet]eller[e-postbeskyttet], eller vennligst ring oss på +86 15810650221 eller legg til Whatsapp +86 15810650221, eller Wechat: 15810650221.
Vennligst skann QR-koden for å legge til på Whatsapp eller WeChat.
Innleggstid: Des-07-2023