Comet Assay (Single Cell Gel Electrophoresis, SCGE) er en sensitiv og rask teknikk som primært brukes til å oppdage DNA-skade og reparasjon i individuelle celler. Navnet "Comet Assay" kommer fra den karakteristiske kometlignende formen som vises i resultatene: cellekjernen danner "hodet", mens de skadede DNA-fragmentene migrerer, og skaper en "hale" som ligner en komet.
Prinsipp
Prinsippet for Comet Assay er basert på migrering av DNA-fragmenter i et elektrisk felt. Intakt DNA forblir i cellekjernen, mens skadet eller fragmentert DNA migrerer mot anoden og danner kometens "hale". Lengden og intensiteten på halen er direkte proporsjonal med omfanget av DNA-skade.
Prosedyre
- Celleforberedelse: Celler som skal testes blandes med agarose med lavt smeltepunkt og spres på objektglass for å danne et jevnt lag.
- Cellelyse: Objektglassene nedsenkes i en lyseringsløsning for å fjerne cellemembranen og kjernemembranen, og eksponere DNA.
- Elektroforese: Objektglassene plasseres i et elektroforesekammer under alkaliske eller nøytrale forhold. Skadede DNA-fragmenter migrerer mot den positive elektroden under påvirkning av det elektriske feltet.
- Farging: Etter elektroforese farges objektglassene med et fluorescerende fargestoff (f.eks. etidiumbromid) for å visualisere DNA.
- Mikroskopisk analyse: Ved hjelp av et fluorescensmikroskop eller spesialisert programvare analyseres kometformene, og parametere som halelengde og intensitet måles.
Bilde fra biorender
Dataanalyse
Resultater fra Comet Assay er evaluert basert på flere nøkkelparametere:
- Halelengde: Representerer avstanden DNA-et migrerer, og indikerer omfanget av DNA-skade.
- Halens DNA-innhold: Prosentandelen av DNA som migrerer inn i halen, ofte brukt som et kvantitativt mål på DNA-skade.
- Olive Tail Moment (OTM): Kombinerer både halelengde og hale-DNA-innhold for å gi et mer omfattende mål på DNA-skade.
Søknader
- Genotoksisitetsstudier: Comet Assay er mye brukt for å vurdere effekten av kjemikalier, medikamenter og stråling på celle-DNA, noe som gjør den til et nøkkelverktøy for genotoksisitetstesting.
- Miljøtoksikologi: Det hjelper til med å analysere virkningen av miljøgifter på DNA til organismer, og gir innsikt i økosystemsikkerhet.
- Medisinsk og klinisk forskning: Comet Assay brukes til å studere DNA-reparasjonsmekanismer, kreft og andre DNA-relaterte sykdommer. Den evaluerer også virkningen av kreftbehandlinger som strålebehandling og kjemoterapi på DNA.
- Mat- og landbruksvitenskap: Brukes til å vurdere sikkerheten til plantevernmidler, mattilsetningsstoffer og andre stoffer, og for å studere deres toksiske effekter i dyremodeller.
Fordeler
- Høy følsomhet: I stand til å oppdage lave nivåer av DNA-skade.
- Enkel betjening: Teknikken er grei, noe som gjør den egnet for screening med høy gjennomstrømning.
- Bred applikasjon: Den kan brukes på ulike celletyper, inkludert dyre- og planteceller.
- Kvantifiseringsutfordringer: Mens den gir kvalitative data om DNA-skader, er kvantitativ analyse sterkt avhengig av programvare og bildeanalyseteknikker.
- Eksperimentelle forhold: Resultatene kan påvirkes av faktorer som elektroforesetid og pH, som krever nøye kontroll av eksperimentelle forhold.
Begrensninger
Comet Assay er et uvurderlig verktøy innen biomedisinsk forskning, miljøvitenskap og medikamentutvikling på grunn av sin fleksibilitet og høye følsomhet for å oppdage DNA-skader og reparasjon. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)tilbyr horisontalt elektroforesekammer for kometanalyse. Velkommen til å kontakte oss for å diskutere omComet Assayprotokoll.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har spesialisert seg på produksjon av elektroforeseinstrumenter i mer enn 50 år med vårt eget profesjonelle tekniske team og FoU-senter. Vi har pålitelig og komplett produksjonslinje fra design til inspeksjon, og lager, samt markedsstøtte. Våre hovedprodukter er elektroforesecelle (tank/kammer), elektroforesestrømforsyning, blå LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbilde- og analysesystem etc. Vi leverer også laboratorieinstrumenter som PCR-instrument, vortex-mikser og sentrifuge for laboratoriet.
Hvis du har en kjøpsplan for produktene våre, ikke nøl med å kontakte oss. Du kan sende oss melding på e-post[e-postbeskyttet]eller[e-postbeskyttet], eller vennligst ring oss på +86 15810650221 eller legg til Whatsapp +86 15810650221, eller Wechat: 15810650221.
Vennligst skann QR-koden for å legge til på Whatsapp eller WeChat.
Innleggstid: 20. september 2024