Prinsipp
Celluloseacetatfilmelektroforese er en elektroforesemetode som bruker en celluloseacetatfilm som støtte. Fenomenet der ladede partikler beveger seg mot den motsatte elektroden under påvirkning av elektrisk felt kalles elektroforese. Siden hvert protein har et spesifikt isoelektrisk punkt, hvis et protein plasseres i en løsning med en pH lavere enn dets isoelektriske punkt, vil proteinet være positivt ladet og bevege seg mot den negative elektroden. Tvert imot beveger den seg til den positive polen. Fordi hastigheten til proteinmolekyler som beveger seg i et elektrisk felt er relatert til ladningen deres, formen og størrelsen på molekylene, kan forskjellige proteiner separeres ved elektroforese. Serum inneholder en rekke proteiner, som alle har isoelektriske punkter ved pH 7,5 eller mindre. Når serum plasseres i pH 8,6 buffer for å kjøre elektroforese, er alle serumproteiner negativt ladet og vil bevege seg mot den positive siden i det elektriske feltet. Siden ulike serumproteiner har forskjellige ladninger ved samme pH, er molekylpartiklene forskjellige i størrelse, og dermed er migrasjonshastigheten forskjellig, og de separeres ved elektroforese. De isoelektriske punktene og molekylvektene til serumproteiner er vist i tabellen nedenfor:
| Protein | Isoelektriske punkter (PI) | Molekylvekt |
| Albumin | 4,88 | 69 000 |
| α1-gloulin | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulin | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulin | 5.12 | 9 000–150 000 |
| y-gloulin | 6,85~7,50 | 156 000~ 300 000 |
Eksperimentet går ut på å separere ulike proteiner i blodserum med celluloseacetatmembran (forkortet CAM) som støttemedium. CAM er en slags skumplastefilm med god uniform, og tykkelsen er 0,1 mm-1,5 mm, som har en viss vannabsorpsjon.
Materialer, instrumenter og reagenser for CAM-elektroforese
Eksempler:sunt humant blodserum
Instrument:strømforsyning DYY-6C, elektroforesetank DYCP-38C, overlegen prøvebelastning WD-9404
Reagensene
1) celluloseacetatmembran 7X9cm
2) PH 8,6 barbitolbufferløsning (ionestyrke 0,05-0,09, det er 0,06 tid.): ta 1,84 g dietylbarbitursyre, og ta deretter 1,03 g dietylnatriumpentobarbital, tilsett litt destillert vann for å varmes opp for å oppløses, og lag opptil 1000 ml;
3) Flekk: Ponceau S 0,2 g, trikloreddiksyre 3 g, tilsett 100 ml destillert vann;
4) TBS/T eller PBS/T: 45 ml 95 % etanol, 5 ml iseddik, tilsett 50 ml destillert vann;
5) Renseløsning: 70 ml vannfri etanol, 30 ml iseddik.
Eksperiment Method
1) Klargjør membranen: Senk membranen ned i barbitolbufferløsningen 30min-8t, og ta den ut, fjern den ekstra løsningen med absorberende papir.
2) Laste inn prøver: Skille den grove siden og den glatte siden av membranen, og merk en linje med 1,5 cm avstand til den øvre enden på den grove siden. Last inn prøver med overlegen prøvelastingsverktøy på den grove siden. Merk: Prøvene skal legges på den grove siden av membranen. Etter at serumprøvene er helt penetrert inn i membranen, snu membranen, legg den grove siden (med prøver) med forsiden ned til tanken, og enden med prøver plasseres i negativ elektrode.
3) Elektroforese: Slå på strømforsyningen, 0,4～0,6m A/cm membran, kjøretiden er 30-45 min. Etter å ha kjørt elektroforese, slå av strømmen.
4) Beis og rengjør: Ta ut membranen fra tanken, og dyppit inn i fargeløsningen i 5 minutter, og rengjør den deretter i rengjøringsløsningen om og om igjen i 3-4 ganger til bakgrunnsfargen er klar. Serumproteinene skal vises på båndene, og normalt er det fem soner som danner toppenden til den markerte linjen, Albumin, α1-gloulin, α2-gloulin, β-gloulin, γ-gloulin.
5) Konservering: legg den tørre elektroforesebåndi rengjøringsløsning i 10-15 minutter, og ta den deretter ut og stikk den på et rent glass, etter at den tørker, vil den bli en gjennomsiktig filmbånd.
EksperimentResultat
Separasjonseffekten av serumprøver er god, og det er ikke noe båndhale-fenomen. Repeterbarheten av resultatene varierer på grunn av testprosedyrene og metodene til forsøkslederen, og repeterbarheten er høy.
Konklusjon
Det raske kliniske elektroforesedeteksjonssystemet (ElektroforesetankDYCP-38C,strømforsyningDYY-6C og overlegen prøvelasting WD-9404) produsert av vårselskapet Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdoppfyller de eksperimentelle kravene,ogresultatene er reproduserbare, enkle og raske, egnet forundervisningforske.
Beijing LiuyiBiotechnology Co.,Ltd spesialiserer seg på å produsere elektroforeseprodukter for biovitenskapsindustrien, somhar mer enn 50 års historie i Kina og selskapet kan tilby stabile og høykvalitetsprodukter over hele verden. Gjennom år med utvikling, er det verdig ditt valg!
Vi ser nå etter partnere, både OEM elektroforesetank og distributører er velkommen.
For mer informasjon om oss, vennligst kontakt oss på e-post[e-postbeskyttet]eller[e-postbeskyttet].
Innleggstid: 14. november 2022