Introduksjon
Gelelektroforese er en grunnleggende teknikk innen molekylærbiologi, mye brukt for separasjon av proteiner, nukleinsyrer og andre makromolekyler. Riktig kontroll av prøvevolum, spenning og elektroforesetid er avgjørende for å oppnå nøyaktige og reproduserbare resultater.Vår lab-kollega tilbyrbeste praksis for å administrere disse parameterne under SDS-PAGE gelelektroforese.
Beijing Liuyi Bioteknologi gel elektroforese produkter
Prøvevolum: Sikrer konsistens
Når du utfører SDS-PAGE-elektroforese, er prøvevolumet en nøkkelfaktor som kan påvirke oppløsningen av resultatene betydelig. Det anbefales generelt å fylle 10 µL totalt protein per brønn. For å sikre konsistens og forhindre prøvediffusjon mellom tilstøtende brønner, er det viktig å fylle et likt volum av 1x lastebuffer i alle tomme brønner. Denne forholdsregelen bidrar til å forhindre spredning av prøver til nærliggende baner, noe som kan oppstå hvis brønnen blir stående tom.
Før du laster inn prøvene dine, start alltid med å legge til en molekylvektmarkør i en brønn. Dette muliggjør enkel identifikasjon av proteinstørrelser etter elektroforese.
Spenningskontroll: Balansering av hastighet og oppløsning
Spenningen som påføres under elektroforese påvirker direkte både hastigheten prøvene migrerer med gjennom gelen og oppløsningen av separasjonen. For SDS-PAGE anbefales det å starte med en lav spenning på rundt 80V. Denne innledende lave spenningen gjør at prøvene kan migrere sakte og jevnt, og konsentrere dem i et skarpt bånd når de kommer inn i skillegelen.
Når prøvene har kommet helt inn i skillegelen, kan spenningen økes til 120V. Denne høyere spenningen akselererer migrasjonen, og sikrer at proteinene effektivt separeres i henhold til deres molekylvekt. Det er viktig å overvåke fremdriften til bromfenolblå fargestofffronten, som indikerer fullføringen av elektroforesen. For geler med en konsentrasjon på 10-12 % er 80-90 minutter vanligvis tilstrekkelig; Men for 15 % geler må du kanskje forlenge kjøretiden litt.
Tidsstyring: Å vite når du skal stoppe
Timing er en annen kritisk faktor i gelelektroforese. Å kjøre gelen i for lang eller for kort periode kan føre til suboptimal separasjon. Migreringen av bromfenolblått fargestoff er en nyttig indikator: når den når bunnen av gelen, er det vanligvis på tide å stoppe løpeturen. For standardgeler, slik som 10-12 %, er en elektroforesevarighet på ca. 80-90 minutter typisk tilstrekkelig. For høyere prosentandel geler, som 15 %, bør kjøretiden forlenges for å sikre fullstendig separasjon av proteiner.
Bufferhåndtering: Gjenbruk og klargjøring av buffere
Elektroforesebuffer kan gjenbrukes 1-2 ganger, avhengig av laboratoriets spesifikke forhold. For optimale resultater anbefales det imidlertid å tilberede fersk 10x buffer og fortynne den rett før bruk. Dette sikrer at bufferen opprettholder sin effektivitet, noe som fører til mer pålitelige elektroforeseresultater.
Beijing Liuyi Bioteknologi gel elektroforese produkter
Ved å kontrollere prøvevolumet, spenningen og elektroforesetiden nøye, kan du forbedre nøyaktigheten og reproduserbarheten av gelelektroforeseresultatene betraktelig. Implementering av disse beste praksisene i laboratoriearbeidet ditt vil hjelpe deg med å oppnå klarere og mer distinkte bånd, noe som fører til bedre data for nedstrømsanalyse.
Hvis du har flere gode metoder for å optimalisere gelelektroforeseeksperiment, velkommen til å diskutere med oss!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) har spesialisert seg på produksjon av elektroforeseinstrumenter i mer enn 50 år med vårt eget profesjonelle tekniske team og FoU-senter. Vi har pålitelig og komplett produksjonslinje fra design til inspeksjon, og lager, samt markedsstøtte. Våre hovedprodukter er elektroforesecelle (tank/kammer), elektroforesestrømforsyning, blå LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbilde- og analysesystem etc. Vi leverer også laboratorieinstrumenter som PCR-instrument, vortex-mikser og sentrifuge for laboratoriet.
Hvis du har en kjøpsplan for produktene våre, ikke nøl med å kontakte oss. Du kan sende oss melding på e-post[e-postbeskyttet]eller[e-postbeskyttet], eller vennligst ring oss på +86 15810650221 eller legg til Whatsapp +86 15810650221, eller Wechat: 15810650221.
Vennligst skann QR-koden for å legge til på Whatsapp eller WeChat.
Innleggstid: 20. august 2024