Hva er polyakrylamidgelelektroforese?

Polyakrylamid gelelektroforese

Gelelektroforese er en grunnleggende teknikk i laboratorier på tvers av biologiske disipliner, som tillater separasjon av makromolekyler som DNA, RNA og proteiner. Ulike separasjonsmedier og mekanismer gjør at undergrupper av disse molekylene kan separeres mer effektivt ved å utnytte deres fysiske egenskaper. For proteiner spesielt er polyakrylamidgelelektroforese (PAGE) ofte den foretrukne teknikken.

PAGE er en teknikk som skiller makromolekyler som proteiner basert på deres elektroforetiske mobilitet, det vil si analyttenes evne til å bevege seg mot en elektrode med motsatt ladning. I PAGE bestemmes dette av ladningen, størrelsen (molekylvekten) og formen til molekylet. Analytter beveger seg gjennom porene dannet i polyakrylamidgel. I motsetning til DNA og RNA, varierer proteiner i ladning i henhold til aminosyrene som er inkorporert, noe som kan påvirke hvordan de fungerer. Aminosyrestrenger kan også danne sekundære strukturer som påvirker deres tilsynelatende størrelse og følgelig hvordan de er i stand til å bevege seg gjennom porene. Det kan derfor noen ganger være ønskelig å denaturere proteiner før elektroforese for å linearisere dem hvis et mer nøyaktig estimat av størrelse er nødvendig.

SDS-SIDE

Natrium-dodecylsulfat polyakrylamidgelelektroforese er en teknikk som brukes til å separere proteinmolekyler med masser 5 til 250 kDa. Proteinene separeres utelukkende på grunnlag av deres molekylvekt. Natriumdodecylsulfat, et anionisk overflateaktivt middel, tilsettes i fremstillingen av geler som maskerer de indre ladningene til proteinprøvene og gir dem et tilsvarende forhold mellom ladning og masse. Med enkle ord denaturerer det proteinene og gir dem en negativ ladning.

Native PAGE

Native PAGE er en teknikk som bruker ikke-denaturerte geler for separering av proteiner. I motsetning til SDS PAGE tilsettes ingen denatureringsmiddel ved fremstilling av geler. Som et resultat skjer separasjonen av proteiner på grunnlag av ladning og størrelse på proteinene. I denne teknikken er konformasjonen, foldingen og aminosyrekjedene til proteinene faktorene som separasjonen er avhengig av. Proteinene blir ikke skadet i denne prosessen, og kan gjenvinnes etter fullført separasjon.

Hvordan fungerer polyakrylamidgelelektroforese (PAGE)?

Det grunnleggende prinsippet for PAGE er å skille analytter ved å føre dem gjennom porene på en polyakrylamidgel ved hjelp av en elektrisk strøm. For å oppnå dette polymeriseres en akrylamid-bisakrylamidblanding (polyakrylamid) ved tilsetning av ammoniumpersulfat (APS). Reaksjonen, som er katalysert av tetrametyletylendiamin (TEMED), danner en nettlignende struktur med porer som analytter kan bevege seg gjennom (figur 2). Jo høyere prosentandel av totalt akrylamid som er inkludert i gelen, jo mindre porestørrelse, derav jo mindre proteiner vil kunne passere gjennom. Forholdet mellom akrylamid og bisakrylamid vil også påvirke porestørrelsen, men dette holdes ofte konstant. Mindre porestørrelser reduserer også hastigheten som små proteiner er i stand til å bevege seg gjennom gelen med, og forbedrer oppløsningen og hindrer dem i å renner raskt ut i bufferen når strøm påføres.

Utstyr for polyakrylamidgelelektroforese

Gelelektroforesecelle (tank/kammer)
Geltanken for polyakrylamidgelelektroforese (PAGE) er forskjellig fra agarosegeltanken. Agarosegeltanken er horisontal, mens PAGE-tanken er vertikal. Ved vertikal elektroforesecelle (tank/kammer) helles en tynn gel (normalt 1,0 mm eller 1,5 mm) mellom to glassplater og monteres slik at bunnen av gelen er nedsenket i buffer i ett kammer og toppen nedsenket i buffer. i et annet kammer. Når strøm påføres, migrerer en liten mengde buffer gjennom gelen fra toppkammeret til bunnkammeret. Med sterke klemmer for å garantere at monteringen forblir i oppreist stilling, muliggjør utstyret raske gelløp med jevn avkjøling som resulterer i tydelige bånd.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) produserer en rekke størrelser av polyakrylamidgelelektroforeseceller (tanker/kamre). Modellene DYCZ-20C og DYCZ-20G er vertikale elektroforeseceller (tanker/kamre) for DNA-sekvensanalyse. Noen av de vertikale elektroforesecellene (tanker/kamre) er kompatible med blotting-system, som modellen DYCZ-24DN, DYCZ-25D og DYCZ-25E er kompatible med Western Blotting-system modell DYCZ-40D, DYCZ-40G og DYCZ-40F, som brukes til å overføre proteinmolekylet fra gelen til membranen. Etter SDS-PAGE-elektroforese er Western Blotting en teknikk for å oppdage et spesifikt protein i en proteinblanding. Du kan velge disse blottingsystemene i henhold til de eksperimentelle kravene.

Elektroforese strømforsyning
For å gi elektrisitet for å kjøre gelen, trenger du en elektroforesestrømforsyning. Hos Liuyi Biotechnology tilbyr vi en rekke elektroforesestrømforsyninger for alle bruksområder. Modellen DYY-12 og DYY-12C med høy stabil spenning og strøm kan møte høyspenningskrav elektroforese. Den har funksjonen stand, timing, VH og trinn-for-steg-applikasjon. De er ideelle for IEF- og DNA-sekvenseringselektroforeseapplikasjoner. For generell bruk av protein- og DNA-elektroforese har vi modellen DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, og så videre, som også er varme salgsstrømforsyninger med elektroforeseceller (tanker/kamre). Disse kan brukes til mellom- og lavspenningselektroforeseapplikasjoner, som for skolelabbruk, sykehuslab og så videre. Flere modeller for strømforsyninger, vennligst besøk vår nettside.

Liuyi-merket har mer enn en 50-årig historie i Kina, og selskapet kan tilby stabile og høykvalitetsprodukter over hele verden. Gjennom mange års utvikling, er det verdig ditt valg!

For mer informasjon om oss, vennligst kontakt oss på e-post[e-postbeskyttet] or [e-postbeskyttet].

Referanser for Hva er polyakrylamidgelelektroforese?
1. Karen Steward PhD polyakrylamidgelelektroforese, hvordan det fungerer, teknikkvarianter og bruksområder