Vi delte flere vurderinger forrige uke for bruk av celluloseacetatmembranelektroforese, og vi vil avslutte dette emnet her i dag for referanse.
Utvalg av Bufferkonsentrasjon
Bufferkonsentrasjonen som brukes i celluloseacetatmembranelektroforese er generelt lavere enn den som brukes i papirelektroforese.Den vanlige pH 8,6Barbitalbuffer velges typisk innenfor området 0,05 mol/L til 0,09 mol/L.Ved valg av konsentrasjon foretas en foreløpig bestemmelse.For eksempel, hvis lengden på membranstripen mellom elektrodene i elektroforesekammeret er 8-10 cm, kreves det en spenning på 25V per centimeter membranlengde, og strømintensiteten skal være 0,4-0,5 mA per centimeter membranbredde.Hvis disse verdiene ikke oppnås eller overskrides under elektroforese, bør bufferkonsentrasjonen økes eller fortynnes.
En for lav bufferkonsentrasjon vil resultere i en rask bevegelse av båndene og en økning i båndbredden.På den annen side vil en for høy bufferkonsentrasjon bremse båndmigrasjonen, noe som gjør det vanskelig å skille visse separasjonsbånd.
Det skal bemerkes at i celluloseacetatmembranelektroforese ledes en betydelig del av strømmen gjennom prøven, som genererer en betydelig mengde varme.Noen ganger kan den valgte bufferkonsentrasjonen anses som passende.Men under forhold med økt miljøtemperatur eller ved bruk av høyere spenning, kan fordampningen av vann på grunn av varmen intensiveres, noe som resulterer i en for høy bufferkonsentrasjon og til og med føre til at membranen tørker ut.
Prøvevolum
I celluloseacetatmembranelektroforese bestemmes mengden prøvevolum av forskjellige faktorer, inkludert elektroforeseforhold, egenskapene til selve prøven, fargemetoder og deteksjonsteknikker.Som et generelt prinsipp, jo mer sensitiv deteksjonsmetoden er, desto mindre kan prøvevolumet være, noe som er fordelaktig for separasjon.Hvis prøvevolumet er for stort, kan det hende at de elektroforetiske separasjonsmønstrene ikke er klare, og farging kan også være tidkrevende.Men når man kvantitativt analyserer de separerte fargede båndene ved bruk av kolorimetriske elueringsdeteksjonsmetoder, bør prøvevolumet ikke være for lite, da det kan resultere i lavere absorbansverdier for visse komponenter, noe som fører til høyere feil ved beregning av innholdet.I slike tilfeller bør prøvevolumet økes passende.
Vanligvis varierer prøvevolumet tilsatt på hver centimeter av prøvepåføringslinjen fra 0,1 til 5 μL, tilsvarende en prøvemengde på 5 til 1000 μg.For eksempel, i rutinemessig serumproteinelektroforeseanalyse, overskrider ikke prøvevolumet tilsatt på hver centimeter av påføringslinjen vanligvis 1 μL, tilsvarende 60 til 80 μg protein.Men når man analyserer lipoproteiner eller glykoproteiner med samme elektroforesemetode, må prøvevolumet økes tilsvarende.
Avslutningsvis bør det best egnede prøvevolumet velges basert på spesifikke forhold gjennom en rekke foreløpige eksperimenter.
Valg av fargeløsning
De separerte båndene i celluloseacetatmembranelektroforese farges vanligvis før deteksjon.Ulike prøvekomponenter krever forskjellige fargingsmetoder, og fargingsmetodene som er egnet for celluloseacetatmembranelektroforese er kanskje ikke helt anvendelige på filterpapir.
Det er tre hovedprinsipper å velge fargeløsning forcelluloseacetatmembran.For det første,Vannløselige fargestoffer bør foretrekkes fremfor alkoholløselige fargestoffer for å unngå membrankrymping og deformasjon forårsaket av sistnevntes fargeløsning.Etter farging er det viktig å skylle membranen med vann og minimere fargingsvarigheten.Ellers kan membranen bli krøllet eller krympet, noe som vil påvirke etterfølgende deteksjon.
For det andre er det å foretrekke å velge fargestoffer med sterk fargeaffinitet for prøven.I celluloseacetatmembranelektroforese av serumproteiner brukes amino black 10B ofte på grunn av dens sterke fargingaffinitet for forskjellige serumproteinkomponenter og dens stabilitet.
For det tredje bør pålitelige kvalitetsfargestoffer velges.Noen fargestoffer, til tross for at de har samme navn, kan inneholde urenheter som resulterer i en spesielt mørk bakgrunn etter farging.Dette kan til og med gjøre de opprinnelig godt adskilte båndene uskarpe, noe som gjør dem vanskelige å skille.
Til slutt er valget av fargeløsningskonsentrasjon viktig.Teoretisk kan det se ut til at en høyere fargeløsningskonsentrasjon vil føre til grundigere farging av prøvekomponenter og bedre fargingsresultater.Dette er imidlertid ikke tilfelle.Bindingsaffiniteten mellom prøvekomponentene og fargestoffet har en viss grense, som ikke øker med økningen i fargeløsningskonsentrasjonen.Tvert imot, en for høy konsentrasjon av fargeløsninger sløser ikke bare fargestoffet, men gjør det også vanskelig å oppnå en klar bakgrunn.Dessuten, når fargeintensiteten når en viss maksimal verdi, følger ikke fargestoffets absorbansekurve et lineært forhold, spesielt ved kvantitative målinger. Ved celluloseacetatmembranelektroforese er fargeoppløsningskonsentrasjonen generelt lavere enn den som brukes i papirelektroforese.
Detaljer å vite om Beijing Liuyi Bioteknologi's celluloseacetatmembranelektroforesetank og dens elektroforeseapplikasjon, vennligst besøk her:
lEksperiment for å separere serumprotein med Cellulose Acetate Membrane
lCelluloseacetatmembranelektroforese
lFlere hensyn bør tas i betraktning når du bruker celluloseacetatmembranelektroforese (1)
Hvis du har en kjøpsplan for produktene våre, ikke nøl med å kontakte oss.Du kan sende oss melding på e-post[e-postbeskyttet]eller[e-postbeskyttet], eller vennligst ring oss på +86 15810650221 eller legg til Whatsapp +86 15810650221, eller Wechat: 15810650221.
Henvisning:Electrophoresis (andre utgave) av Mr. Li
Innleggstid: Jun-06-2023